Avaliação dos efeitos in vivo e in vitro da 21-p-hexoxi-m-metoxibenzilideno digoxina (BD-15) nas respostas induzidas por LPS.
Ano de defesa: | 2023 |
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Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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Resumo: | Quando o processo inflamatório acontece no sistema nervoso central (SNC) ele é chamado de Neuroinflamação. Esse processo é intimamente relacionado com a neurodegeneração, é um sintoma comum em diversas doenças que causam comprometimento tanto físico quanto cognitivo, como Parkinson e Alzheimer. A Na/K-ATPase (NKA) é uma enzima onipresente, cuja função é a manutenção do gradiente eletroquímico de Na+ e K+ em um organismo em homeostase. A partir da década de 90, a sinalização celular mediada pela NKA é descrita como um fenômeno capaz de guiar importantes processos na fisiologia celular como a inflamação. Os esteroides cardiotônicos, como a digoxina, possuem um mecanismo clássico no qual ao se ligarem a NKA causam inibição da atividade desta enzima, porém estudos atuais mostram a capacidade dessas substâncias desencadearem cascatas de sinalização anti-inflamatórias. A BD-15 é um fármaco sintético derivada da digoxina (utilizada no tratamento de insuficiência cardíaca congestiva) que possui resultados preliminares promissores em relação a testes comportamentais e bioquímicos. A droga mostrou maior seletividade a isoforma <font face = \"symbol\">a3 da NKA, presente principalmente em neurônios. O presente estudo visa verificar por meio de parâmetros de estresse oxidativo, modulação de lipídios e expressão de citocinas o potencial neuroprotetor da BD-15 e a indução da neuroinflamação em linhagem celular de células da glia (BV-2) e no hipocampo de ratos. Nas culturas de BV-2, os ensaios de MTT e LDH mostraram que tanto a BD-15 quanto o LPS não promoveram uma citotoxidade significativa em relação ao controle não tratado. Ademais, o tratamento em conjunto não mostrou toxicidade aditiva dos dois compostos. Observou-se um aumento dos níveis de TNF-<font face = \"symbol\">a nos grupos tratados com LPS e LPS + BD-15 em relação ao grupo controle tratado apenas com o veículo, porém esse efeito não foi visto nos níveis de citocina IL-1<font face = \"symbol\">b. Observou-se um perfil de redução do GSH e aumento de H2O2 nos grupos tratados com LPS, tanto em amostras de BV-2 quanto em hipocampo de animais tratados. Adicionalmente, o tratamento apenas com a BD-15 e LPS+BD-15 não mostrou alteração em relação ao controle nos mesmos ensaios. Nos ensaios de fosfolipídios (Pi) totais verificou-se uma tendencia a diminuição dos níveis de Pi apenas nos animais do grupo LPS. Na análise dos níveis de colesteróis totais nas amostras de hipocampos nota-se um aumento, não significativo, dos níveis nos grupos tratado com a BD-15 e LPS+BD-15. Ao unirmos esses dados em uma relação colesterol/fosfolipídios, o grupo LPS possui a maior relação entre esses dois tipos de lipídios enquanto os grupos tratados com BD-15 e LPS+BD-15 mantém o padrão encontrado no grupo controle, não tratado. Conclui-se então que embora os resultados in vitro não corresponderem ao padrão de reprodutibilidade e necessitem ser refeitos, os resultados apresentados in vivo mostram-se promissores em se tratar de elucidar mais sobre a atuação da BD-15 no estresse oxidativo e seu potencial neuroprotetor no modelo de neuroinflamação induzida por LPS. |
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Avaliação dos efeitos in vivo e in vitro da 21-p-hexoxi-m-metoxibenzilideno digoxina (BD-15) nas respostas induzidas por LPS.Evaluation of the in vivo and in vitro effects of 21-p-hexoxy-mmethoxybenzylidene digoxin (BD-15) on LPS-induced responses.BD-15BD-15BV-2BV-2Cardiotonic SteroidsDigoxinDigoxinaEsteroides CardiotônicosEstresse OxidativoHipocampoHippocampusLPSLPSNeuroinflamaçãoNeuroinflammationOxidative StressQuando o processo inflamatório acontece no sistema nervoso central (SNC) ele é chamado de Neuroinflamação. Esse processo é intimamente relacionado com a neurodegeneração, é um sintoma comum em diversas doenças que causam comprometimento tanto físico quanto cognitivo, como Parkinson e Alzheimer. A Na/K-ATPase (NKA) é uma enzima onipresente, cuja função é a manutenção do gradiente eletroquímico de Na+ e K+ em um organismo em homeostase. A partir da década de 90, a sinalização celular mediada pela NKA é descrita como um fenômeno capaz de guiar importantes processos na fisiologia celular como a inflamação. Os esteroides cardiotônicos, como a digoxina, possuem um mecanismo clássico no qual ao se ligarem a NKA causam inibição da atividade desta enzima, porém estudos atuais mostram a capacidade dessas substâncias desencadearem cascatas de sinalização anti-inflamatórias. A BD-15 é um fármaco sintético derivada da digoxina (utilizada no tratamento de insuficiência cardíaca congestiva) que possui resultados preliminares promissores em relação a testes comportamentais e bioquímicos. A droga mostrou maior seletividade a isoforma <font face = \"symbol\">a3 da NKA, presente principalmente em neurônios. O presente estudo visa verificar por meio de parâmetros de estresse oxidativo, modulação de lipídios e expressão de citocinas o potencial neuroprotetor da BD-15 e a indução da neuroinflamação em linhagem celular de células da glia (BV-2) e no hipocampo de ratos. Nas culturas de BV-2, os ensaios de MTT e LDH mostraram que tanto a BD-15 quanto o LPS não promoveram uma citotoxidade significativa em relação ao controle não tratado. Ademais, o tratamento em conjunto não mostrou toxicidade aditiva dos dois compostos. Observou-se um aumento dos níveis de TNF-<font face = \"symbol\">a nos grupos tratados com LPS e LPS + BD-15 em relação ao grupo controle tratado apenas com o veículo, porém esse efeito não foi visto nos níveis de citocina IL-1<font face = \"symbol\">b. Observou-se um perfil de redução do GSH e aumento de H2O2 nos grupos tratados com LPS, tanto em amostras de BV-2 quanto em hipocampo de animais tratados. Adicionalmente, o tratamento apenas com a BD-15 e LPS+BD-15 não mostrou alteração em relação ao controle nos mesmos ensaios. Nos ensaios de fosfolipídios (Pi) totais verificou-se uma tendencia a diminuição dos níveis de Pi apenas nos animais do grupo LPS. Na análise dos níveis de colesteróis totais nas amostras de hipocampos nota-se um aumento, não significativo, dos níveis nos grupos tratado com a BD-15 e LPS+BD-15. Ao unirmos esses dados em uma relação colesterol/fosfolipídios, o grupo LPS possui a maior relação entre esses dois tipos de lipídios enquanto os grupos tratados com BD-15 e LPS+BD-15 mantém o padrão encontrado no grupo controle, não tratado. Conclui-se então que embora os resultados in vitro não corresponderem ao padrão de reprodutibilidade e necessitem ser refeitos, os resultados apresentados in vivo mostram-se promissores em se tratar de elucidar mais sobre a atuação da BD-15 no estresse oxidativo e seu potencial neuroprotetor no modelo de neuroinflamação induzida por LPS.When the inflammatory process occurs in the central nervous system (CNS), it is called neuroinflammation. This process is closely related to neurodegeneration and is a common symptom in various diseases that cause both physical and cognitive impairment, such as Parkinson\'s and Alzheimer\'s. The Na/K-ATPase (NKA) is an omnipresent enzyme whose function is to maintain the electrochemical gradient of Na+ and K+ in a homeostatic organism. Since the 1990s, NKA-mediated cellular signaling has been described as a phenomenon capable of guiding important processes in cellular physiology, such as inflammation. Cardiotonic steroids, like digoxin, have a classical mechanism in which they bind to NKA, causing inhibition of its enzyme activity. However, current studies show the ability of these substances to trigger anti-inflammatory signaling cascades. BD-15 is a synthetic drug derived from digoxin (used in the treatment of congestive heart failure) that has promising preliminary results in behavioral and biochemical tests. The drug has shown greater selectivity for the <font face = \"symbol\">a3 isoform of NKA, which is mainly present in neurons. This study aims to evaluate, through parameters of oxidative stress, lipid modulation, and cytokine expression, the neuroprotective potential of BD-15 and its induction of neuroinflammation in a glial cell line (BV-2) and in the hippocampus of rats. In BV-2 cell cultures, MTT and LDH assays showed that both BD-15 and LPS did not promote significant cytotoxicity compared to the untreated control. Furthermore, the combined treatment did not show additive toxicity of the two compounds. An increase in TNF-<font face = \"symbol\">a levels was observed in the groups treated with LPS and LPS + BD-15 compared to the control group treated only with the vehicle, but this effect was not seen in the levels of the cytokine IL-1<font face = \"symbol\">b. A profile of reduced GSH and increased H2O2 levels was observed in the groups treated with LPS, both in BV-2 samples and in the hippocampus of treated animals. Additionally, treatment with BD-15 alone and LPS+BD-15 did not show any changes compared to the control group in the same assays. Total phospholipids (Pi) assays showed a tendency towards decreased Pi levels only in the LPS group. In the analysis of total cholesterol levels in hippocampal samples, a non-significant increase in levels was observed in the groups treated with BD-15 and LPS+BD-15. When combining these data into a cholesterol/phospholipid ratio, the LPS group had the highest ratio between these two types of lipids, while the groups treated with BD-15 and LPS+BD15 maintained the pattern found in the untreated control group. It is concluded, therefore, that although the in vitro results do not correspond to the standard of reproducibility and need to be redone, the in vivo results presented are promising in terms of further elucidating the role of BD-15 in oxidative stress and its potential neuroprotective effects in the model of LPS-induced neuroinflammation.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPScavone, CristoforoSilva, Maria Luiza Correia da2023-09-15info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-14122023-101330/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2023-12-15T14:48:02Zoai:teses.usp.br:tde-14122023-101330Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212023-12-15T14:48:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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Quando o processo inflamatório acontece no sistema nervoso central (SNC) ele é chamado de Neuroinflamação. Esse processo é intimamente relacionado com a neurodegeneração, é um sintoma comum em diversas doenças que causam comprometimento tanto físico quanto cognitivo, como Parkinson e Alzheimer. A Na/K-ATPase (NKA) é uma enzima onipresente, cuja função é a manutenção do gradiente eletroquímico de Na+ e K+ em um organismo em homeostase. A partir da década de 90, a sinalização celular mediada pela NKA é descrita como um fenômeno capaz de guiar importantes processos na fisiologia celular como a inflamação. Os esteroides cardiotônicos, como a digoxina, possuem um mecanismo clássico no qual ao se ligarem a NKA causam inibição da atividade desta enzima, porém estudos atuais mostram a capacidade dessas substâncias desencadearem cascatas de sinalização anti-inflamatórias. A BD-15 é um fármaco sintético derivada da digoxina (utilizada no tratamento de insuficiência cardíaca congestiva) que possui resultados preliminares promissores em relação a testes comportamentais e bioquímicos. A droga mostrou maior seletividade a isoforma <font face = \"symbol\">a3 da NKA, presente principalmente em neurônios. O presente estudo visa verificar por meio de parâmetros de estresse oxidativo, modulação de lipídios e expressão de citocinas o potencial neuroprotetor da BD-15 e a indução da neuroinflamação em linhagem celular de células da glia (BV-2) e no hipocampo de ratos. Nas culturas de BV-2, os ensaios de MTT e LDH mostraram que tanto a BD-15 quanto o LPS não promoveram uma citotoxidade significativa em relação ao controle não tratado. Ademais, o tratamento em conjunto não mostrou toxicidade aditiva dos dois compostos. Observou-se um aumento dos níveis de TNF-<font face = \"symbol\">a nos grupos tratados com LPS e LPS + BD-15 em relação ao grupo controle tratado apenas com o veículo, porém esse efeito não foi visto nos níveis de citocina IL-1<font face = \"symbol\">b. Observou-se um perfil de redução do GSH e aumento de H2O2 nos grupos tratados com LPS, tanto em amostras de BV-2 quanto em hipocampo de animais tratados. Adicionalmente, o tratamento apenas com a BD-15 e LPS+BD-15 não mostrou alteração em relação ao controle nos mesmos ensaios. Nos ensaios de fosfolipídios (Pi) totais verificou-se uma tendencia a diminuição dos níveis de Pi apenas nos animais do grupo LPS. Na análise dos níveis de colesteróis totais nas amostras de hipocampos nota-se um aumento, não significativo, dos níveis nos grupos tratado com a BD-15 e LPS+BD-15. Ao unirmos esses dados em uma relação colesterol/fosfolipídios, o grupo LPS possui a maior relação entre esses dois tipos de lipídios enquanto os grupos tratados com BD-15 e LPS+BD-15 mantém o padrão encontrado no grupo controle, não tratado. Conclui-se então que embora os resultados in vitro não corresponderem ao padrão de reprodutibilidade e necessitem ser refeitos, os resultados apresentados in vivo mostram-se promissores em se tratar de elucidar mais sobre a atuação da BD-15 no estresse oxidativo e seu potencial neuroprotetor no modelo de neuroinflamação induzida por LPS. |
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