Efeito da hipóxia na expressão de PAR-4 (Prostate Apoptosis Response-4) em linhagens celulares de câncer de mama

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Bobrovnitchaia, Irina Gueroldovna
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Breast neoplasms; Expressão gênica; Gene expression; Hipóxia; Hypoxia; Linhagem celular tumoral; Neoplasias da mama; PAR-4; Tumor cell line
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-20012015-155824/

O câncer de mama é a neoplasia de maior ocorrência na população feminina. É uma doença hormônio-dependente com etiologia complexa e multifatorial. O câncer de mama invasivo é uma das principais causas da morbidade e mortalidade de mulheres no mundo. O desenvolvimento e a progressão de câncer de mama estão associados com acúmulo de várias alterações genéticas e epigenéticas, que resultam na expressão gênica diferencial entre células normais e tumorais. A hipóxia pode ser considerada uma das características principais de tumores sólidos e uma força motriz para a sobrevida das células tumorais e progressão maligna. O gene supressor de tumor PAWR (PKC apoptosis WT1 regulator; também denominado PAR-4, prostate apoptosis response-4) tem importante papel na apoptose tanto pela via intrínseca quanto pela via extrínseca e pode ser considerado um alvo para a terapia seletiva de células tumorais uma vez que a expressão de PAR-4 aumenta a sensibilidade da maioria das células de câncer a um segundo estímulo apoptótico. Alguns estudos, incluindo os de nosso grupo, têm mostrado o envolvimento de PAR-4 em câncer de mama e seu papel como fator prognóstico e preditivo de resposta a quimioterapia. No entanto, pouco é conhecido sobre o papel funcional deste gene ou os mecanismos envolvidos na regulação da expressão de PAR-4 na glândula mamária e no processo de tumorigênese da mama. No presente trabalho investigamos os efeitos da hipóxia na expressão de PAR-4 nas linhagens celulares MCF10A, MCF7 e MDA-MB-231. Para isto, as células foram incubadas por períodos de 30 minutos, 1, 2, 6 ou 24 horas em ambiente controlado com 5 % CO2, 95% N2 e 0.2% O2. A expressão de Par-4 foi avaliada quanto aos transcritos, por PCR em Tempo Real e quanto à expressão protéica, por western blot. Observamos que a baixa concentração de oxigênio diminui a expressão do mRNA de PAR-4, em tempos de 6 e 24 horas, nas linhagens MCF10A e MCF7 e no tempo de 24h nas células MDA-MB-231. Já quando os níveis protéicos de Par-4 foram analisados não foi observada diferença significativa nessas células após exposição à condição de hipóxia. A expressão do gene NDRG1, a qual se encontra aumentada em condições de hipóxia, foi utilizada como controle. Nossos dados sugerem que a expressão dos transcritos do gene supressor de tumor PAR-4 é inibida pelos mecanismos celulares de sobrevivência celular ativados durante a hipóxia