Caracterização do papel das vesículas extracelulares liberadas pelo Trypanosoma cruzi na indução de dano no DNA de células epiteliais não fagocíticas

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Córdova, Raul Alexander Gonzáles
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: γ-ATM; γ-H2AX; Trypanosoma cruzi; DNA damage response; Extracellular vesicles; Resposta ao dano no DNA; Vesículas extracelulares
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-02092025-144947/

A Doença de Chagas (DC) ou Tripanossomíase Americana é uma doença tropical negligenciada causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Durante o processo de infecção no mamífero vertebrado, o T. cruzi pode infectar diferentes tipos celulares e tecidos. Uma vez dentro da célula hospedeira, o T. cruzi tem a capacidade de alterar e modular diversas vias metabólicas e de sinalização celular e molecular com o intuito de manter sua sobrevivência no interior da célula hospedeira e progredir na infecção. Embora o conhecimento sobre este parasito seja vasto, a interação entre o parasito e o núcleo da célula hospedeira tem sido pouco abordado. Recentemente, nosso grupo de pesquisa demonstrou que o processo de infecção induziu quebras no DNA das células infectadas e ativou a maquinaria de dano e reparo em resposta às injúrias no DNA. Adicionalmente, observamos que na cultura celular durante a infecção pelo T. cruzi, as células não infectadas também exibiam danos no seu DNA, levando-nos a questionar se as EVs liberadas pelo parasita poderiam também induzir danos no DNA na célula hospedeira. A análise do Ensaio Cometa das células desafiadas com as EVs de T. cruzi, isoladas de formas tripomastigotas, mostraram quebras no seu DNA tendo o tempo de 1 hora como o tempo de maior quantidade de quebras. Vimos também que a célula desafiada desencadeia uma resposta frente a este dano ativando a via de resposta ao dano no DNA (DDR) mediante a ativação das proteínas H2AX e ATM, formando focos nucleares. Esta ativação da via DDR foi observada nas primeiras 12 horas de interação da célula desafiada com as EVs seguido de uma diminuição às 24 horas. Esta diminuição na sinalização do dano ao DNA está sustentada pela ativação da proteína de reparo DNA-PK, que forma parte da via de reparo por junção de extremidades não homologas (NHEJ). Pela primeira vez, observamos a indução de dano no DNA das células não fagocíticas através da exposição das EVs de T. cruzi e estudamos a dinâmica das principais proteínas responsáveis da resposta ao dano no DNA. Também foi observado que os danos no DNA induzidos pelas EVs seguem um padrão dose-reposta e que nas primeiras 48 horas de interação, as EVs de T. cruzi não afetaram a progressão do ciclo celular das células desafiadas. Nós também demonstramos que as EVs de diferentes formas e cepas de T. cruzi, e de formas axênicas de T. brucei e Leishmania spp. induziram a ativação da via DDR nas células desafiadas de forma semelhante, sugerindo que a indução de dano no DNA pelas EVs é conservada entre os tripanossomatídeos e possivelmente segue padrões de adaptação ao hospedeiro. Em conjunto, nossos dados anteriores sobre a ativação da via DDR em células infectadas pelo parasito, somados aos resultados aqui apresentados com células não fagocíticas desafiadas com EVs de T. cruzi, demonstram que o parasito é capaz de modular mecanismos celulares do hospedeiro para garantir sua persistência e progressão durante a infecção. Esses achados contribuem para uma melhor compreensão das interações parasito-hospedeiro durante a infecção pelo T. cruzi.