Recelularização de biomateriais derivados de vasos sanguíneos da superfície alantocoriônica da placenta bovina

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Saragó, Amanda
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bioengenharia tecidual; Células progenitoras endoteliais; Endothelial progenitor cells; Recelularização; Recelularization; Tissue bioengineering
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-18092020-075841/

Com o aumento de doenças vasculares e necessidade de substituição de vasos sanguíneos danificados são crescentes os avanços na bioengenharia de vasos sanguíneos. Embora vasos autólogos sejam a principal opção de uso, muitas vezes podem estar com acesso limitado. Enxertos sintéticos seriam uma alternativa para a substituição. Entretanto, para enxertos de diâmetro menor que 6 mm, a taxa de insucesso a longo prazo é alta, devido a trombo, infecção ou estenose. Atualmente buscam-se alternativas na bioengenharia de tecidos, e dentre os biomateriais de origem animal, temos os derivados de tecidos descelularizados, resultando em arcabouços de matriz extracelular. Assim, biomateriais derivados de órgãos com abundante rede vascular mantida após a descelularização seriam fontes favoráveis para produção de biomateriais vascularizados e/ou enxertos vasculares. Diante disto, a placenta bovina além de possuir abundante sistema vascular, que se assemelha a vasos humanos de pequeno e médio diâmetro. Ela ainda pode ser coletada sem prejuízo ao doador e manter a estrutura e composição da matriz extracelular (MEC) mesmo após a descelularização. Para a recelularização desse biomaterial, células progenitoras endoteliais são necessárias para reconstituição do endotélio, portanto a eleição de uma linhagem progenitora endotelial com superexpressão do fator de crescimento endotelial vascular teria uma maior utilidade para tal finalidade. O presente estudo tem como objetivo geral promover a recelularização em biomateriais derivados de vasos sanguíneos da superfície alantocoriônica da placenta bovina com uso de células progenitoras endoteliais do saco vitelino canino (linhagem SV) e células progenitoras endoteliais do saco vitelino canino transduzidas com VEGF e com superexpressão de eGFP (linhagem SV- VEGF). Para tanto, a placenta bovina foi descelularizada por perfusão com solução SDS, em concentrações crescentes (0,01 a 1 %), e seus vasos sanguíneos derivados da superfície alantocoriônica foram isolados e seccionados para validação da descelularização. O procedimento foi validado por quantificação de gDNA genômico, histologia básica, imunohistoquímica e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Outros fragmentos foram esterilizados sob ponto crítico LEICA EM CPD 300 (-5°C a 40°C), e submetidos à recelularização em cultivo celular estático em placa de 24 poços, com 2,5 x104 células por poço para ambas as linhagens (SV- VEGF e SV) durante 7 dias. Por último a recelularização foi validada por meio marcação nuclear por DAPI em microscopia confocal, imunohistoquímica, histologia básica e microscopia eletrônica de varredura MEV. Os resultados iniciais demonstraram preservação da matriz extracelular após a descelularização e adesão celular inicialmente aos três dias de cultivo para ambas as linhagens de células originárias de fonte xenogênica ao modelo bovino.