Importância da atividade secretora de macrófagos induzida pela Crotoxina sobre as funções de fibroblastos envolvidas com o processo de cicatrização. Estudos in vitro.

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Crispin, Luiz Aurélio de Campos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cicatrização; Crotoxin; Crotoxina; Fibroblast; Fibroblasto; Immunomodulation; Imunomodulação; Inflamação; Inflammation; Macrófago; Macrophage; Wound Healing
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-25102021-163214/

Nas últimas décadas, diversos estudos demonstraram a importante ação anti-inflamatória da CTX, avaliada diretamente sobre funções de neutrófilos e macrófagos, além do seu potencial como imunomodulador, particularmente sobre macrófagos relacionados à progressão tumoral e resposta inflamatória aguda e infecciosa. Esta capacidade imunomoduladora, de longa duração (até 14 dias) da CTX envolve a reprogramação fenotípica de macrófago, tornando-o mais pró- ou anti-inflamatório, dependendo da concentração da toxina e do estímulo do microambiente. Particularmente, com a presença local de macrófagos a produção e liberação dos mediadores químicos produzidos por eles, a migração e ativação de fibroblastos é intensificada, levando à deposição de grandes quantidades de fibronectina e colágeno, o que pode favorecer a fibrose. Portanto, o objetivo do presente projeto foi investigar a importância da atividade secretora de macrófagos induzida pela CTX sobre as funções de fibroblasto envolvidas com o processo de cicatrização. Para tanto, monoculturas de macrófagos diferenciados a partir da linhagem monocítica humana THP-1 foram incubados com diferentes concentrações da CTX, por 2 horas, lavados e incubados com meio RPMI 1640 fresco, por 24 horas e após esse período, fibroblastos humanos foram incubados com os sobrenadantes dessas monoculturas (cel:sobrenadante) ou com os macrófagos (cel:cel) para a determinação in vitro dos eventos dos fibroblastos, em diferentes períodos, tais como: 1) ensaio de proliferação; 2) ensaio de migração no modelo de Wound healing; 3) ensaio de migração em Câmara de transwell; 4) morfologia do citoesqueleto de actina dos fibroblastos e expressão de fibronectina e colágeno tipo I secretados por essas células, visualizados por microscopia confocal; 5) quantificação de 15-Epi-LXA4, por ensaio imunoenzimático (EIA) e 6) Análises proteômica e secretômica de macrófagos tratados com a toxina, por espectrometria de massas. Em conjunto, os resultados apresentados mostram que macrófagos tratados com CTX modulam a atividade funcional de fibroblastos (migração e proliferação e secreção de componentes de matriz), tanto no contato célula:célula, como por meio de mediadores secretados em seus sobrenadantes, de maneira mais pronunciada ao observado para anti-inflamatórios clássicos. Esse estudo contribuiu, portanto, para evidenciar a importância da capacidade imunomoduladora da CTX sobre eventos envolvidos com a cicatrização.