Produ????o heter??loga de dTDP-L-ramnose em cepas recombinantes de Saccharomyces cerevisiae

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Almeida, Gabriela Carneiro de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Cat??lica de Bras??lia; Escola de Sa??de e Medicina; Brasil; UCB; Programa Strictu Sensu em Ci??ncias Gen??micas e Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: L-ramnose; Ramnolip??dio; dTDP-L-ramnose; Engenharia metab??lica; Saccharomyces cerevisiae; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
• Link de acesso: https://bdtd.ucb.br:8443/jspui/handle/tede/2285

A crescente preocupa????o com o meio ambiente vem incentivando a busca por processos produtivos mais sustent??veis. A convers??o de substratos renov??veis em produtos qu??micos pode ser feita por s??ntese qu??mica, por??m, ?? mais comumente feita por microrganismos atrav??s de processos fermentativos. A L-ramnose (6-deoxi-L-ramnose) ?? um a????car com potencial para se tornar um qu??mico de base, j?? que pode ser usada em diversos setores industriais, como precursor para aromas artificiais e at?? como componente de cosm??ticos. Esse a????car tem um dif??cil processo de extra????o da parede celular de plantas, fato que torna sua produ????o em larga escala economicamente invi??vel. Uma fonte para L-ramnose seria a hidr??lise da mol??cula de ramnolip??deo. Rhamnolip??deos s??o biossurfactantes da classe dos glicolip??deos produzidos por Pseudomonas aeruginosa, uma bact??ria patog??nica que aumenta os custos do processo de produ????o devido a coprodu????o com toxinas. Esse surfactante tamb??m possui aplicabilidade industrial devido a sua natureza anfip??tica. Neste estudo, pela primeira vez, os genes que codificam as enzimas da via de s??ntese de dTDP-L-ramnose de P. aeruginosa a partir de glicose-1-fosfato (RmlA, RmlB, RmlC e RmlD) foram transferidos para Saccharomyces cerevisiae. Al??m disso, um gene que codifica uma sacarose fosforilase respons??vel por hidrolisar sacarose em glicose-1-fosfato e frutose, tamb??m foi inserido na levedura com a finalidade de maximizar a convers??o de sacarose a L-ramnose. Ap??s a constru????o das cepas recombinantes, apenas a atividade enzim??tica de RmlA foi detectada. No entanto, a mol??cula dTDP-L-ramnose foi detectada por espectrometria de massa. An??lises de transcri????o mostraram que h?? transcritos detect??veis para os genes codificadores de RmlA, RlmB e RmlD, mas n??o para os genes de sacarose fosforilase e RmlC. Nesse contexto, ?? prov??vel que o plasm??deo que cont??m esses genes ?? inst??vel ou que os mRNAs para esses mesmos genes sejam inst??veis, resultando na baixa produ????o das enzimas sacarose fosforilase e RmlC. Um estudo metab??lico mais detalhado das cepas deve ajudar a identificar os gargalos em torno da produ????o dessa mol??cula, facilitando o delineamento de engenharia metab??lica para aumentar sua produ????o. As cepas finais s??o base para o estabelecimento industrial da produ????o de ramnolip??deos em S. cerevisiae.