Sensibilidade do Orthobunyavirus do grupo C, Oriboca (BeAn 17) aos interferons humanos

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Marieta Torres de Abreu Assis
• Orientador(a): Paulo Cesar Peregrino Ferreira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Microbiologia
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/FAMM-BC8TYX

O arbovírus do grupo C Oriboca (gênero Orthobunyavirus, família Bunyaviridae) foi isolado na Amazônia brasileira durante os anos 50. Em humanos, a doença causada por estes vírus caracteriza-se por febre alta, mialgia, dor ocular e fotofobia, com 4-5 dias de duração. Os vírus dessa família apresentam partículas esféricas, envelopadas, de 100 nm de diâmetro e o genoma é composto por três fitas simples de RNA de polaridade negativa. Os estudos envolvendo esta família viral são ainda escassos. Os interferons são uma família de citocinas e, são componentes do sistema imune inato, sendo a primeira linha de defesa contra uma infecção viral. As células infectadas sintetizam e secretam interferons do tipo I e tipo III, que sinalizam as células vizinhas para expressarem proteínas antivirais na tentativa de conter a multiplicação e evitar a dispersão desse agente, nas células do tecido infectado (estado antiviral). Assim este trabalho teve como objetivos elucidar algumas importantes características envolvendo este membro, desse importante sorogrupo da família Bunyaviridae, como caracterizar sua multiplicação, comparar sua reatividade cruzada através da prova de neutralização e, verificar a atividade antiviral dos IFNs do tipo I e tipo III contra este vírus. Para tal, a amostra do vírus Oriboca foi multiplicada em células Vero e, realizada a clonagem de placa para garantir uma população de vírus homogênea. A reatividade cruzada entre o Oriboca e seus clones foi investigada, utilizando-se soro anti-Apeu e soro anti-arbovírus do grupo C-1. Para avaliar a capacidade do ORIV em induzir IFN in vitro, utilizamos células murinas L929 e o ensaio da medida da atividade antiviral utilizado, para quantificar o IFN presente. Para avaliar a ação dos IFNs á, â e ë1 sobre a multiplicação do vírus Oriboca, células Vero foram tratadas com concentrações variadas dos IFNs e 18 horas depois infectadas com o ORIV. Para avaliar se o uso de IFN do tipo III poderia aumentar os efeitos antivirais dos IFNs do tipo I, células VERO foram tratadas com misturas dos dois tipos de IFNs em concentrações altas ou baixas. Todas essas amostras foram posteriormente tituladas em UFP/mL. E finalmente para avaliar os níveis de expressão dos ISGs 25OAS, PKR, 6-16 e MxA, células humanas A549 foram infectadas em diferentes tempos e o RNA total celular extraído e utilizado como molde em reações de PCR em tempo real.Verificamos que, os IFNs á e â foram capazes de proteger as células VERO contra o ORIV. A atividade antiviral verificada foi dose dependente, e o IFN â o que mais inibiu a multiplicação do ORIV. Possivelmente, esta atividade diferencial dos IFN ocorre devido às diferenças nas afinidades às cadeias do receptor celular. O IFN-ë1 (tipo III) foi capaz de proteger essas células também da infecção pelo ORIV, quando administrado em doses muito superiores àquelas quando comparado aos IFNs á/â. A atividade biológica dos IFNs do tipo III, mesmo redundantes com as atividades dos IFNs do tipo I, são em geral menos intensas e mais restritas. Nós observamos que, células VERO tratadas com uma combinação destes IFNs em doses altas ou baixas não tiveram um efeito antiviral aditivo sobre a muliplicação do ORIV. A expressão dos quatro ISGs (25OAS, PKR, 6-16 e MxA), quantificados por PCR em tempo real foi aumentada nas células A549 após infecção pelo ORIV. Com este trabalho mostramos que o ORIV é sensível aos IFNs do tipo I e III em maior ou menor grau e, embora utilizem receptores distintos para sinalizarem, essas duas famílias de IFN compartilham algumas características comuns, como as vias de transdução de sinais ativadas e os estímulos requeridos para a sua produção. Esses resultados confirmam dados prévios descritos para outros Bunyavirus. Os dados sugerem que, o sistema imune inato desempenha um importante papel no controle do ORIV e um potencial terapêutico dos IFNs do tipo I e III no controle das arboviroses. Mais estudos serão necessários para caracterizar a sensibilidade aos IFNs do tipo I e III para outros membros da família Bunyaviridae, bem como avaliar outros IFNs como o tipo II (IFN ã) e também o IFN lambda2 para membros dessa família.