Investigação das diferenças sexuais no perfil proteômico e na ativação neuronal da amígdala de camundongos submetidos a extinção ou reinstalação da busca de etanol

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Rodolpho, Ben Tagami [UNIFESP]
• Orientador(a): Cruz, Fábio Cardoso [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002vr31
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Etanol; Reinstalação; Autoadministração operante; Camundongos; Diferenças sexuais; Proteoma
• Palavras-chave em Inglês: Ethanol; Reinstatement; Operant self-administration; Mice; Sexual differences; Proteome
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11600/73759

O transtorno por uso de álcool é um fenômeno complexo e múltiplas variáveis podem interferir no início, manutenção e na recaída ao consumo. Nesse contexto, o estresse parece ser um dos principais fatores indutores de recaída para indivíduos com transtorno por uso de álcool. Evidências apontam que a interação entre estresse, consumo e recaída de etanol parece ser mediado pelos sistemas de neurotransmissões localizados na região da amígdala estendida. Em especial, neurônios localizados nos núcleos da amígdala parecem desempenhar papel importante na mediação dessa região em resposta a um estímulo estressante. Além disso, evidencias apontam que machos e fêmeas parecem diferir nas repostas comportamentais e fisiológicas a exposição ao estresse e a administração de etanol. Assim, o presente projeto teve dois objetivos: investigar na amígdala de camundongos machos e fêmeas alterações proteômicas relacionadas a abstinência ao consumo de etanol, e analisar a ativação neuronal na amígdala durante o processo de reinstalação da busca por etanol induzida pelo estresse. Para isso, no primeiro experimento, camundongos machos e fêmeas foram submetidos a uma semana de consumo forçado de etanol 9% + sacarose 2% ou apenas sacarose 2% durante 8 dias. Logo após, foram submetidos ao protocolo de aquisição da autoadministração operante destas substâncias, que consistiu em 3 sessões overnights de 16 horas e 15 sessões de 1 hora na razão fixa 4. Por fim, foram realizadas 14 sessões de extinção de 1 hora, sem a oferta dos reforços, seguidas da extração dos encéfalos para análise do perfil proteômico da amígdala. No segundo experimento, camundongos machos e fêmeas foram submetidos ao mesmo protocolo para aquisição e extinção da autoadministração operante de etanol. No dia seguinte ao último dia de extinção, os animais foram submetidos ao protocolo de estresse de restrição por 2 horas. Imediatamente após ao término do protocolo de estresse, os animais foram colocados nas caixas de autoadministração por 1h, em uma sessão com os mesmos parâmetros da extinção (teste de reinstalação). Após o teste os animais foram perfundidos e fatia coronais contendo a amígdala foram obtidas com auxílio do criostato. Estes cortes foram utilizados para a realização da técnica de imunofluorescência. No primeiro experimento, foi observado que as fêmeas apresentaram maior consumo de sacarose durante os 8 dias de consumo forçado, e maior consumo de etanol durante o treino para aquisição da autoadministração operante. A análise proteômica quantitativa da amígdala destes animais mostrou que 704 proteínas estavam diferencialmente expressas entre os grupos. Através da análise de enriquecimento, observamos em machos e fêmeas, alterações proteicas relacionadas a vias de sinalização glutamatérgica, GABAérgica e dopaminérgica, bem como de vias pós-sinápticas relacionadas à proteína G. Pudemos observar alterações em processos de plasticidade sináptica, como potenciação e depressão de longo prazo, além de alterações em proteínas relacionadas ao ciclo de vesícula sináptica. Para o teste de reinstalação, observamos que o estresse de restrição não promoveu a reinstalação da busca por etanol, embora tenha promovido aumento na ativação da região da amígdala em fêmeas. Nesse sentido, as fêmeas apresentaram maior número de nosepokes ativos em comparação com os machos. Já os machos do grupo submetido ao estresse, apresentaram menor quantidade de nosepokes ativos em relação aos machos controle. Assim nossos resultados sugerem que a autoadministração operante de etanol seguida pela extinção desse comportamento promove alterações singulares em proteínas da amígdala de camundongos e que o estresse de reinstalação pode afetar de maneira diferente a ativação neuronal da amígdala entre camundongos machos e fêmeas.