Avaliação comparativa de distintos métodos fenotípicos para a detecção de cepas produtoras de carbapenemases
| Ano de defesa: | 2016 |
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Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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Resumo: | Ao longo da ultima década, tem sido observada uma rápida evolução da resistência aos antimicrobianos entre isolados clínicos de Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., e Acinetobacter spp., em todo mundo. A produção de ?-lactamases é o mecanismo de resistência mais importante em bacilos gram-negativos, sendo as carbapenemases a família mais versátil destas enzimas. Estas enzimas possuem amplo espectro de atividade o que dificulta a seleção da terapia antimicrobiana. Além disto, os genes que as codificam, de modo geral, são altamente transmissíveis. Objetivo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente cinco metodologias fenotípicas para a detecção de carbapenemases em bacilos gram-negativos. Métodos: Foram selecionadas amostras controles da coleção de micro-organismos do LEMC/Alerta. A confirmação da produção ou não de carbapenemases foi realizada pela hidrólise do ertapenem no MALDI-TOF MS. Os testes fenotípicos avaliados foram: o teste de Hodge modificado, a Nota Técnica 01/2013 da ANVISA, o Carba NP e a sua adaptação, CarbAcineto NP, o Blue-Carba, o CarbapenemBac e o CarbapenemBac Metalo. Resultados: Embora a especificidade para o MHT e a Nota Técnica tenha sido 100%, a Nota Técnica (97,3%) foi mais sensível na detecção de carbapenemases que o MHT (88,5%). Os testes Carba NP, Blue-Carba e CarbapenemBac apresentaram sensibilidade e especificidade de 100%, quando colônias subcultivadas em ágar Müeller-Hinton foram testadas. A sensibilidade e a especificidade do Carba NP (98,6 e 100%), do Blue-Carba (97,1 e 91%) e do CarbapenemBac (100 e 96,5%) foram discretamente inferiores quando as colônias bacterianas foram obtidas do ágar sangue. Por outro lado, a sensibilidade do Carba NP (71,1%) e do Blue-Carba (68,9%) foram inaceitáveis quando as colônias foram obtidas do ágar MacConkey. Já a sensibilidade do CarbapenemBac (97,3%) foi menos afetada nesta situação. Conclusão: Podemos concluir que: 1. Os métodos colorimétricos apresentaram excelente sensibilidade e especificidade para detecção de carbapenemases, quando as colônias bacterianas foram subcultivadas em ágar Müeller-Hinton ou ágar sangue; 2. Colônias subcultivadas em ágar MacConkey não devem ser utilizadas para realização de testes colorimétricos, com exceção do CarbapenemBac que apresentou boa sensibilidade e especificidade para a detecção de carbapenemases independente do meio de cultura utilizado para subcultivo do isolado a ser testado. |
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http://lattes.cnpq.br/8402272715765172Moura, Jhonatha Rodrigo Cordeiro de [UNIFESP]http://lattes.cnpq.br/2346858488495749Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Gales, Ana Cristina [UNIFESP]São Paulo2018-07-27T15:50:10Z2018-07-27T15:50:10Z2016-08-22Ao longo da ultima década, tem sido observada uma rápida evolução da resistência aos antimicrobianos entre isolados clínicos de Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., e Acinetobacter spp., em todo mundo. A produção de ?-lactamases é o mecanismo de resistência mais importante em bacilos gram-negativos, sendo as carbapenemases a família mais versátil destas enzimas. Estas enzimas possuem amplo espectro de atividade o que dificulta a seleção da terapia antimicrobiana. Além disto, os genes que as codificam, de modo geral, são altamente transmissíveis. Objetivo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente cinco metodologias fenotípicas para a detecção de carbapenemases em bacilos gram-negativos. Métodos: Foram selecionadas amostras controles da coleção de micro-organismos do LEMC/Alerta. A confirmação da produção ou não de carbapenemases foi realizada pela hidrólise do ertapenem no MALDI-TOF MS. Os testes fenotípicos avaliados foram: o teste de Hodge modificado, a Nota Técnica 01/2013 da ANVISA, o Carba NP e a sua adaptação, CarbAcineto NP, o Blue-Carba, o CarbapenemBac e o CarbapenemBac Metalo. Resultados: Embora a especificidade para o MHT e a Nota Técnica tenha sido 100%, a Nota Técnica (97,3%) foi mais sensível na detecção de carbapenemases que o MHT (88,5%). Os testes Carba NP, Blue-Carba e CarbapenemBac apresentaram sensibilidade e especificidade de 100%, quando colônias subcultivadas em ágar Müeller-Hinton foram testadas. A sensibilidade e a especificidade do Carba NP (98,6 e 100%), do Blue-Carba (97,1 e 91%) e do CarbapenemBac (100 e 96,5%) foram discretamente inferiores quando as colônias bacterianas foram obtidas do ágar sangue. Por outro lado, a sensibilidade do Carba NP (71,1%) e do Blue-Carba (68,9%) foram inaceitáveis quando as colônias foram obtidas do ágar MacConkey. Já a sensibilidade do CarbapenemBac (97,3%) foi menos afetada nesta situação. Conclusão: Podemos concluir que: 1. Os métodos colorimétricos apresentaram excelente sensibilidade e especificidade para detecção de carbapenemases, quando as colônias bacterianas foram subcultivadas em ágar Müeller-Hinton ou ágar sangue; 2. Colônias subcultivadas em ágar MacConkey não devem ser utilizadas para realização de testes colorimétricos, com exceção do CarbapenemBac que apresentou boa sensibilidade e especificidade para a detecção de carbapenemases independente do meio de cultura utilizado para subcultivo do isolado a ser testado.During the last decade, it has been observed the rapid development of antimicrobial resistance among clinical isolates of Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., and Acinetobacter spp. worldwide. The production of ?-lactamases is the most important mechanism of resistance in Gram-negative bacilli, being the carbapenemases the most versatile mechanisms of carbapenem resistance. These enzymes have broad spectrum of activity, making difficult the selection of adequate antimicrobial therapy. Furthermore, genes encoding ?-lactamases are highly transmissible. Objective: This study aimed to evaluate the performance of five phenotypic methods for detection of carbapenemase-producing Gram-negative bacilli. Methods: Strains previously characterized were pulled out from the LEMC/ALERTA bank of microorganisms. The confirmation of carbapenemase production was performed by ertapenem hydrolysis using MALDI-TOF MS. The phenotypic tests evaluated were: Hodge modified test, ANVISA Technical Note 01/2013, Carba NP and its modification, CarbAcineto NP, Blue-Carba, CarbapenemBac, and CarbapenemBac Metallo. Results: Although the specificity rates of the ANVISA Technical Note and MHT were 100%, the Technical Note (97.3%) showed higher sensitivity rate than that of the MHT (88.5%) for carbapenemase detection. The Carba NP, Blue-Carba and CarbapenemBac tests showed high sensitivity and specificity rates (100%) when colonies subcultured on Mueller-Hinton agar were tested. The sensitivity and specificity rates of Carba NP (98.6 and 100%), BlueCarba (97.1 and 91%) and CarbapenemBac (96.5 and 100%) were slightly lower when bacterial colonies were obtained from blood agar. On the other hand, the sensitivity rates of Carba NP (71.1%) and Blue-carba (68.9%) were unacceptable when colonies obtained from MacConkey agar were evaluated. However, the sensitivity of CarbapenemBac (97.3% sensitivity) was less affected by the MacConkey agar. Conclusions: We conclude that 1. The colorimetric methods showed excellent sensitivity and specificity for carbapenemases detection when bacterial colonies were subcultured on Mueller-Hinton agar or blood agar; 2. Bacteria colonies subcultured on MacConkey agar must not be utilized for colorimetric tests, except for CarbapenemBac, which showed a good sensitivity and specificity rates for detection of carbapenemases independently of the culture medium used to subculture the bacterial isolate.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016)130 f.https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3748968MOURA, Jhonatha Rodrigo Cordeiro de. Avaliação comparativa de distintos métodos fenotípicos para a detecção de cepas produtoras de carbapenemases. 2016. 130 f. Dissertação (Mestrado em Infectologia) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.2016-0471.pdfhttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46397ark:/48912/001300002qxtsporUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)info:eu-repo/semantics/openAccessCarbapenensOxacilinasesBacilos gram-negativosÁgar macconkeyBlue-carbaCarba npCarbapenensOxacilinasesBacilos gram-negativosÁgar macconkeyBlue-carbaCarba npAvaliação comparativa de distintos métodos fenotípicos para a detecção de cepas produtoras de carbapenemasesComparative study of distinct methodologies for carbapenemases detectioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)InfectologiaCiências da saúdeMedicinaORIGINALJhonatha Rodrigo Cordeiro de Moura - PDF A.pdfJhonatha Rodrigo Cordeiro de Moura - PDF A.pdfDissertação de mestradoapplication/pdf1932287https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/32bd2779-058f-4258-86e6-0b14354848af/download532dfa8aa7e29f8b6d63de9f136cf26aMD51TEXTJhonatha Rodrigo Cordeiro de Moura - PDF A.pdf.txtJhonatha Rodrigo Cordeiro de Moura - PDF A.pdf.txtExtracted texttext/plain115453https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/b21ffddd-aa24-447b-ada4-979b5a4db04a/download60a3ba026ee393dd56d77618a7dbe9bfMD52THUMBNAILJhonatha Rodrigo Cordeiro de Moura - PDF A.pdf.jpgJhonatha Rodrigo Cordeiro de Moura - PDF A.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg3200https://repositorio.unifesp.br/bitstreams/fa49e10c-438c-4e81-8ae8-9c98ce48fc5c/download581c2a575641790c3dcf11851e9bd8e9MD5311600/463972024-07-30 09:16:30.236oai:repositorio.unifesp.br:11600/46397https://repositorio.unifesp.brRepositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.unifesp.br/oai/requestbiblioteca.csp@unifesp.bropendoar:34652024-07-30T09:16:30Repositório Institucional da UNIFESP - Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)false |
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Ao longo da ultima década, tem sido observada uma rápida evolução da resistência aos antimicrobianos entre isolados clínicos de Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., e Acinetobacter spp., em todo mundo. A produção de ?-lactamases é o mecanismo de resistência mais importante em bacilos gram-negativos, sendo as carbapenemases a família mais versátil destas enzimas. Estas enzimas possuem amplo espectro de atividade o que dificulta a seleção da terapia antimicrobiana. Além disto, os genes que as codificam, de modo geral, são altamente transmissíveis. Objetivo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente cinco metodologias fenotípicas para a detecção de carbapenemases em bacilos gram-negativos. Métodos: Foram selecionadas amostras controles da coleção de micro-organismos do LEMC/Alerta. A confirmação da produção ou não de carbapenemases foi realizada pela hidrólise do ertapenem no MALDI-TOF MS. Os testes fenotípicos avaliados foram: o teste de Hodge modificado, a Nota Técnica 01/2013 da ANVISA, o Carba NP e a sua adaptação, CarbAcineto NP, o Blue-Carba, o CarbapenemBac e o CarbapenemBac Metalo. Resultados: Embora a especificidade para o MHT e a Nota Técnica tenha sido 100%, a Nota Técnica (97,3%) foi mais sensível na detecção de carbapenemases que o MHT (88,5%). Os testes Carba NP, Blue-Carba e CarbapenemBac apresentaram sensibilidade e especificidade de 100%, quando colônias subcultivadas em ágar Müeller-Hinton foram testadas. A sensibilidade e a especificidade do Carba NP (98,6 e 100%), do Blue-Carba (97,1 e 91%) e do CarbapenemBac (100 e 96,5%) foram discretamente inferiores quando as colônias bacterianas foram obtidas do ágar sangue. Por outro lado, a sensibilidade do Carba NP (71,1%) e do Blue-Carba (68,9%) foram inaceitáveis quando as colônias foram obtidas do ágar MacConkey. Já a sensibilidade do CarbapenemBac (97,3%) foi menos afetada nesta situação. Conclusão: Podemos concluir que: 1. Os métodos colorimétricos apresentaram excelente sensibilidade e especificidade para detecção de carbapenemases, quando as colônias bacterianas foram subcultivadas em ágar Müeller-Hinton ou ágar sangue; 2. Colônias subcultivadas em ágar MacConkey não devem ser utilizadas para realização de testes colorimétricos, com exceção do CarbapenemBac que apresentou boa sensibilidade e especificidade para a detecção de carbapenemases independente do meio de cultura utilizado para subcultivo do isolado a ser testado. |
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