Estudo bioanalítico e proteômico de sarcoma de Hippopotumus amphibius

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Silva, Adriana Rodrigues [UNIFESP]
• Orientador(a): Assunção, Nilson Antonio de [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/0013000026rtk
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Câncer; Espectrometria de massas; Hipopótamo; Proteômica; Sarcoma
• Palavras-chave em Inglês: Cancer; Mass spectrometry; Hippopotamus; Proteomics; Sarcoma
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2006851; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46389

O presente trabalho almejou realizar o estudo do perfil proteico em sarcoma de Hippopotumus amphibius. Para isso, realizou-se a análise proteômica a partir de três amostras do animal, que veio a falecer devido a doença, o tumor primário, metástase no coração e tecido saudável. Inicialmente realizou-se separação das proteínas do tumor primário e tecido saudável através da eletroforese bidimensional. Posteriormente as proteínas separadas foram digeridas enzimaticamente através da tripsina. A etapa seguinte foi a separação dos peptídeos resultantes por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas, e análise de dados com auxilio com o software Mascot. A pouca quantidade de amostras de tecido disponíveis tornou necessária a utilização de uma segunda metodologia afim de obter resultados complementares. Amostras de tumor primário, metástase de coração, e tecido saudável foram submetidas ao shot gun, sem realizar a separação prévia das proteínas presentes, passando por digestão enzimática, e os peptídeos resultantes passaram também por separação cromotográfica acoplada à espectrometria de massas, utilizando a mesma estratégia de identificação que a primeira metodologia. Embora a separação em gel bidimensional seja uma metodologia com elevado custo operacional e temporal, mostrou ser a mais adequada para a identificação de proteínas envolvidas em processos mais específicos, como as proteínas envolvidas em doenças como o câncer. A primeira metodologia, que utilizou a separação em gel bidimensional, identificou 33 proteínas envolvidas no crescimento e desenvolvimento de tumores e a segunda metodologia, que não utilizou uma separação prévia das proteínas, identificou apenas 8 proteínas, também possivelmente envolvidas nos mesmos processos. Ambas as metodologias tiveram grande valor ao desenvolvimento deste estudo, proporcionando o trabalho com duas vertentes da proteômica, auxiliaram no cumprimento do objetivo proposto, cada qual com sua característica específica. A primeira, mais adequada para a identificação de proteínas envolvidas em processos biológicos mais específicos, A segunda, em uma identificação mais abrangente das possíveis proteínas expressas nos tecidos estudados. Os resultados obtidos terão aplicação em estudos futuros, em que poderá ser verificada a relação dessas proteínas com o desenvolvimento e funcionamento de tumores e também para a constante melhoria da conservação animal, oferecendo entendimento das doenças que os atingem tanto animais como humanos.