Peptídeo ligante da proteína neurotoxina derivada de eosinófilos e suas aplicações no diagnóstico da esofagite eosinofílica

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Narciso, Andreia Santos
• Orientador(a): Goulart Filho, Luiz Ricardo
• Banca de defesa: Maia, Yara Cristina Paiva , Santos, Fabiana de Almeida Araújo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Esofagite eosinofílica; Eosinophilic esophagitis; Diagnóstico; Diagnosis; Phage display; Phage-display; Proteína neurotoxina derivada de eosinófilos; Eosinophil-derived neurotoxin protein
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
• Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/21540; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.710

Introdução: A esofagite eosinofílica (EEo) é uma doença crônica, alérgica e inflamatória caracterizada clinicamente por disfunção esofágica e fibrose, e histologicamente pelo aumento do número de infiltrado eosinofílico no epitélio do esôfago. Seus principais sintomas são disfagia e dor no peito e o principal desafio da ciência hoje é a definição de um diagnóstico seguro para a doença. Com isso, esclarecimento dessa questão conduz os esforços científicos para níveis moleculares com o intuito de obter marcadores de diagnóstico e prognóstico para a doença, que são inexistentes até o momento. Objetivo: Selecionar peptídeos através da técnica molecular de Phage display que possam ser utilizados como biomarcadores da EEo. Material e métodos: Num primeiro momento, foram realizadas análises proteômica comparativa usando cromatografia líquida - espectrometria de massa em biópsias esofágicas de pacientes pediátricos com EEo, doença do refluxo gastroesofágico (DRGE) e grupo controle. Em seguida, a tecnologia Phage Display foi utilizada para selecionar peptídios ligantes à proteína identificada como uma das mais reguladas em pacientes com EEo. A reatividade dos fagos selecionados foi avalida por phage-ELISA usando uma proteína recombinante humana comercial. Além disso, as sequências peptídicas foram determinadas por sequenciamento de DNA e a ligação dos péptidios ao seu alvo proteico foi analisada por ferramentas de predição in silico. Resultados: Os resultados da espectrometria de massa mostraram que a proteína neurotoxina derivada de eosinófilos (NDE), uma proteína do grânulo de eosinófilo que é depositada em tecidos doentes, foi altamente regulada em pacientes com EEo. Através de ensaios de phage-ELISA, dois peptídeos altamente reativos à ligação com a NDE (D3 e C5) apresentaram reatividade similar e até maior quando comparados com anticorpos policlonais comerciais para NDE. Conclusão: O estudo demonstrou que os peptídeos selecionados por Phage-display, detectaram a proteína recombinante NDE e, por isso, eles podem ser uma importante ferramenta de diagnóstico para a detecção de pacientes com EEo.