Multiplicidade de proteínas tóxicas no veneno do escorpião brasileiro Tityus serrulatus. Isolamento da TsTx-IV, uma nova toxina

• Ano de defesa: 1984
• Autor(a) principal: Arantes, Eliane Candiani
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Não informado.
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-30032026-153316/

Através de cromatografia em coluna de CM-celulose-52 da fração NT, obtida segundo Sampaio et al. (1983) e considerada \"não tóxica\", foi isolada a toxina CM-V,a qual apresentou pico simétrico, banda eletroforética única em gel de poliacrilamica, Lys como único resíduo amino-terminal, 59 resíduos de aminoácidos, peso molecular 6.515, e composição em aminoácidos semelhante à toxina y (Possani et al., 1977). A injeção endovenosa desta toxina (200 mg/kg) em ratos anestesiados causou pequeno aumento inicial da pressão arterial, seguido de prolongado efeito hipotensor e progressiva redução da frequência cardíaca. A metodologia apresentada neste trabalho para o desdobramento do veneno de Tityus serrulatus em seus componentes ativos é rápida, reprodutível e apresentou boa recuperação do material aplicado. Consiste de extração do veneno bruto dessecado com tampão NH4HCO3 0,01 M, pH 7,8, cromatografia em CM-celulose-52 a pH 7,8 e recromatografia das frações obtidas em CM-celulose-52 utilizando tampão NH4Ac, pH 4,7. Através desta metodologia foram isoladas 6 frações tóxicas (injeção intraperitoneal em camundongos de 20g) e puras (pico simétrico, apenas um resíduo amino terminal, banda eletroforética única), que foram parcialmente caracterizada como segue: 1. Toxina XIII: caracterizada como sendo uma proteína com 62 resíduos de aminoácidos, peso molecular 6.865, Lys como único resíduo N-terminal, e composição em aminoácidos que a identificou com a toxina y (Possani et al., 1977). 2. Toxina IX3: resíduo N-terminal Gly, 72 +Trp resíduos de aminoácidos, peso molecular 7.657, é a mesma ou altamente homóloga à toxina T1VI (Sampaio et al.,1983). 3. Toxina IX5: resíduo N-terminal Lys, 59 resíduos de aminoácidos e peso molecular 6.605, considerada aqui igual à toxina X3, também obtida por nós, por apresentarem o mesmo N-terminal, composição em aminoácidos semelhantes, mesma migração eletroforética e serem eluídas em uma mesma concentração de NH4Ac. Estas toxinas identificaram-se com a toxina III - 8 (Possani et al., 1981). 4. Toxina X4: resíduo N-terminal Lys, 48 + Trp + 1/2 Cys resíduos de aminoácidos, peso molecular 5.137, se caracterizou por não possuir metionina e se identificou com a Tityustoxina (Coutinho Netto, 1975). S. Toxina XII1: resíduo N-terminal Lys, 52 + 1/2 Cys resíduos de aminoácidos, peso molecular 5.826, apresentou composição em aminoácidos semelhante à toxina XIII, mas revelou diferente migração eletroforética e foi eluída em uma menor concentração de tampão NH4HCO6, de onde se conclui ser uma toxina semelhante mas não igual à toxina XIII. 6. Toxina X2: resíduo N-terminal Lys, 61 resíduos de aminoácidos, peso molecular 6.885. Caracterizou-se por não possuir Val e I1e, o que sugere alto grau de pureza. Foi considerada igual à toxina IX4,obtida a partir da recromatografia da fração IX, por revelarem ambas o mesmo resíduo N-terminal, com posição em aminoácidos semelhantes, mesma migração eletroforética e serem eluídas na mesma concentração de tampão NH6Ac. Para esta toxina, que não se identificou com nenhuma outra toxina de T. serrulatus já descrita, sugerimos a denominação de TsTx-IV. As toxinas CM-V, XIII, IX5 e X2 foram avaliadas em canal deferente isolado de cobaia e apresentaram efeito supersensibilizante a nível pré-juncional, provavelmente por aumento da liberação de NA. O peso molecular, determinado para as toxinas XIII IX5 e X2, através de eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS, foi de aproximadamente 7.000, o que confirma os valores calculados em função do peso molecular dos resíduos de aminoácidos. A DL50 e respectivos intervalo de confiança (P=0,05) do veneno solúvel e das toxinas XIII, IX5, X2 e X4, determinada por injeção intracisternal em camundongos de 20g, foi 16,25 ± 4,27 mg/Kg, 1,11 ± 0,34 mg/kg, 3,73 ± 2,31 mg/kg, 11,21 ± 8,82 mg/kg e 1,71 ± 0,68 mg/kg, respectivamente.