Identificação de fatores de transcrição com potencial de alvo terapêutico em células infectadas por diferentes sublinhagens de HPV-18 e -16

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2024
Autor(a) principal: Nunes, Valéria Talpe
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Fatores de transcrição
Human papillomavirus
Neoplasias do colo do útero
Papilomavírus humano
Transcrição viral
Transcription factors
Uterine cervical neoplasms
Viral Transcription
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-31072025-164333/
Resumo: A infecção persistente por papilomavírus humanos (HPV) de alto risco oncogênico está associada com o desenvolvimento do câncer da cérvice uterina, e de regiões anogenitais como vulva, vagina, pênis, ânus, além da orofaringe. Diversos fatores de transcrição celulares (FTs) se ligam à LCR viral e são capazes de regular a atividade transcricional dos HPV, modulando a expressão das regiões abertas de leitura (ORF) E6 e E7 que codificam as principais oncoproteínas que interagem com diversas vias celulares de forma a induzir um ambiente celular favorável ao vírus e possivelmente tumorigênico. Dada a importância dos sítios de ligação de FTs celulares na LCR, a variabilidade genética encontrada nesta região entre os HPV-16 e HPV-18 pode ser um importante fator que contribui para diferenças no potencial oncogênico reportado entre diferentes tipos e sublinhagens de HPV. Assim, avaliamos o impacto de mais de 500 FTs humanos sobre a atividade transcricional do promotor precoce de HPV-16 (P97) e HPV-18 (P105), realizando um ensaio de expressão dupla de luciferase. Foram transfectadas células C33A com plasmídeos de expressão de cDNA dos FTs e constructos contendo a região completa da LCR e o promotor precoce dos diferentes HPV e sublinhagens a montante do gene da luciferase de vagalume. A luciferase de renilla foi utilizada como normalizador do ensaio. No total, foram identificados 130 FTs com impacto diferencial sobre a atividade transcricional dos HPV-16 e HPV-18, e entre esses, 70 FTs apresentaram um impacto maior ou menor do que duas vezes em comparação à atividade basal do promotor precoce. Análises in sílico de predição de sítios putativos revelaram que 27 FTs poderiam se ligar diretamente à LCR dos HPV-16 e -18. Entre esses, foram selecionados seis FTs para os ensaios de validação: HOXB13, NR2E1, c-MYB, GATA3, FOXO1 e TBX21 de forma a confirmar-se ou não o impacto desses FTs sobre a atividade transcricional dos HPV-16 e -18. Os FTs identificados no estudo podem levar a novos alvos terapêuticos para o tratamento de tumores causados por HPV de alto risco, além de aprofundar o conhecimento dos mecanismos moleculares da regulação da transcrição viral
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Diversos fatores de transcrição celulares (FTs) se ligam à LCR viral e são capazes de regular a atividade transcricional dos HPV, modulando a expressão das regiões abertas de leitura (ORF) E6 e E7 que codificam as principais oncoproteínas que interagem com diversas vias celulares de forma a induzir um ambiente celular favorável ao vírus e possivelmente tumorigênico. Dada a importância dos sítios de ligação de FTs celulares na LCR, a variabilidade genética encontrada nesta região entre os HPV-16 e HPV-18 pode ser um importante fator que contribui para diferenças no potencial oncogênico reportado entre diferentes tipos e sublinhagens de HPV. Assim, avaliamos o impacto de mais de 500 FTs humanos sobre a atividade transcricional do promotor precoce de HPV-16 (P97) e HPV-18 (P105), realizando um ensaio de expressão dupla de luciferase. Foram transfectadas células C33A com plasmídeos de expressão de cDNA dos FTs e constructos contendo a região completa da LCR e o promotor precoce dos diferentes HPV e sublinhagens a montante do gene da luciferase de vagalume. A luciferase de renilla foi utilizada como normalizador do ensaio. No total, foram identificados 130 FTs com impacto diferencial sobre a atividade transcricional dos HPV-16 e HPV-18, e entre esses, 70 FTs apresentaram um impacto maior ou menor do que duas vezes em comparação à atividade basal do promotor precoce. Análises in sílico de predição de sítios putativos revelaram que 27 FTs poderiam se ligar diretamente à LCR dos HPV-16 e -18. Entre esses, foram selecionados seis FTs para os ensaios de validação: HOXB13, NR2E1, c-MYB, GATA3, FOXO1 e TBX21 de forma a confirmar-se ou não o impacto desses FTs sobre a atividade transcricional dos HPV-16 e -18. Os FTs identificados no estudo podem levar a novos alvos terapêuticos para o tratamento de tumores causados por HPV de alto risco, além de aprofundar o conhecimento dos mecanismos moleculares da regulação da transcrição viralThe persistent infection by high-risk oncogenic human papillomaviruses (HPV) is associated with the development of cervical cancer, and tumors in anogenital regions as the vulva, vagina, penis, anal canal, in addition to the oropharynx. Several cellular transcription factors (TF) bind to the viral LCR and can regulate HPV transcriptional activity, modulating the expression of the E6 and E7 open reading frames (ORF), which comprises the main oncoproteins that interact with cellular pathways to maintain a favorable cellular ambient to the virus, and possible lead to a tumorigenic process. Given the importance of the binding sites of cellular TFs in the LCR, the nucleotide variability in this region could be an important factor contributing to the differential oncogenic potential between different HPV types and sublineages. Thus, we evaluated the impact of over 500 human TFs upon the transcriptional activity of the early promoter of HPV-16 (P97) and HPV-18 (P105) with a double luciferase expression assay. We transfected C33A cells with cDNA expression plasmids of each TFs and plasmids containing the complete region of the LCR and early promoter of the different HPV types and sublineages controlling the firefly luciferase gene. The renilla luciferase was used as the assay normalizer. In total, we identified 130 TFs with a differential impact upon the transcriptional activity of HPV-16 and -18, and among those, 70 TFs had an impact over or bellow two times the basal early promoter activity. Putative binding site in silico analysis shown that 27 of these TFs could directly bind to the viral LCR. We selected six TFs among these possible interactors for further validation: HOXB13, NR2E1, c-MYB, GATA3, FOXO1 and TBX21, confirming or not the impact of these TFs over the transcriptional activity of HPV-16 and -18. Thus, the TFs identified in our study could lead to new therapeutic targets to treat tumors associated with high-risk HPV infection, and further elucidate the molecular mechanisms of viral transcriptional regulationBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPVettorazzo, Laura Cristina SicheroNunes, Valéria Talpe2024-12-13info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-31072025-164333/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-08-01T19:25:02Zoai:teses.usp.br:tde-31072025-164333Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-08-01T19:25:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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