Caracterização lipídica de espermatozoides de homens férteis e homens inférteis com oligoastenozoospermia

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Caetano, Marília Alves
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cromatografia líquida; Espectrometria de massas; Espermatozoide humano; Fertilidade masculina; Human spermatozoa; Lipidômica; Lipidomics; Liquid chromatograpy; Male fertility; Mass spectrometry
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-05012024-155214/

Os lipídios desempenham um papel fundamental na membrana plasmática do espermatozoide, ajudando a manter sua integridade estrutural, funcionalidade e estão diretamente relacionados ao processo de capacidade de fertilização. Apesar de sua relevância, as informações sobre o perfil lipídico das células espermáticas humanas são limitadas. Sendo assim, o principal objetivo desse estudo foi realizar a caracterização lipídica de espermatozoides de homens férteis e homens inférteis com oligoastenozoospermia por meio da técnica de cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) e o perfilamento por monitoramento de reações múltiplas (MRM). Foi realizado um estudo prospectivo observacional onde extratos lipídicos de amostras seminais de 10 homens férteis e 10 homens inférteis foram analisados. A extração lipídica foi feita através do protocolo de Bligh & Dyer adaptado para espermatozoides e armazenados a -80 ºC até a data de envio para análise. As amostras foram enviadas via correio terrestre em temperatura ambiente após selagem a vácuo. A eficiência do processo de extração e envio foi confirmada por uma análise inicial realizada em um pool das amostras. A primeira etapa do método de transições MRM detectou a presença de 15 tipos de lipídios presentes nas amostras (a partir de uma seleção inicial de 66 metabólitos feita em bases de dados). A análise estatística dos dados obtidos na segunda etapa identificou 9 lipídios diferencialmente expressos entre os dois grupos, representados por 6 fosfolipídios (PC) e 3 esfingomielinas (SM), estando em maior abundância no grupo infértil, corroborando a relação existente entre lipídios espermáticos e a fertilidade masculina. O estudo evidencia que a padronização das técnicas de extração lipídica, armazenamento, envio dos extratos lipídicos, LC-MS/MS e transições MRM possibilitou a análise lipídica gamética de maneira rápida e sensível, utilizando pequenas quantidades de amostra. Com a exceção da PC (38:5), que foi previamente associada a uma maior fertilidade em estudos anteriores, todas as diferenças observadas foram consistentes com a literatura e contribuíram para uma melhor análise dos lipídios envolvidos com a infertilidade. Mais estudos utilizando essa mesma abordagem serão necessários para detectar possíveis biomarcadores individuais, sendo que as espécies lipídicas detectadas neste estudo (PC (34:0); PC (16:0); PC (34:2); PC (28:1); PC (36:2); SM (C18:0); SM (d18:1/16:1); SM C16:1(d18:0/16:1)) serão apontadas como os principais alvos.