Aplicação do método de monitoramento de reações múltiplas (MRM-profiling) para a caracterização lipídica de espermatozoides de homens férteis e subférteis

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Borges, Eduardo Domingos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Espectrometria de massas; Espermatozoide humano; Fertilidade masculina; Human sperm; Lipidômica; Lipidomics; Male fertility; Mass spectrometry; MRM-profiling
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17145/tde-23082020-110105/

Os lipídios espermáticos são fundamentais para a integridade do sistema de membranas e determinam muitas de suas importantes propriedades físico-químicas que, por sua vez, estão intimamente relacionadas com a capacidade de fertilização. Apesar de sua clara importância, os dados disponíveis sobre o perfil lipídico das células espermáticas humanas são limitados. As técnicas de espectrometria de massas mais comumente utilizadas para obter esses dados têm resultados informativos, porém amplamente dominados por sinais de fosfatidilcolina (PC) e liso-fosfatidilcolina (LPC) que impedem a detecção de outras classes lipídicas. Sendo assim, o principal objetivo deste estudo foi implementar o método de MRM-profiling utilizando um equipamento de espectrometria de massas com ionização por electrospray (ESI-MS) para a análise de células espermáticas de homens férteis e subférteis possibilitando a detecção simultânea de diversas classes lipídicas de interesse. Além disso, objetivou-se comparar os valores observados nos dois grupos a fim de identificar espécies lipídicas diretamente relacionadas à fertilidade masculina. Foi realizado um estudo prospectivo observacional onde extratos lipídicos de amostras seminais de 10 homens férteis e 10 homens subférteis foram analisados utilizando técnica e método previamente mencionados. Os lipídios foram extraídos usando o protocolo de Bligh & Dyer adaptado para espermatozoides e armazenados a -80 ºC até a data de envio para análise. O envio foi feito via correio aéreo internacional em temperatura ambiente após selagem a vácuo. Uma análise inicial confirmou a eficiência do processo de extração e o transporte das amostras seladas à vácuo, em temperatura ambiente. A primeira etapa do método de MRM-profiling detectou a presença de 417 espécies lipídicas nas amostras (a partir de uma seleção inicial de 1287 feita em bases de dados). A análise estatística dos dados obtidos na segunda etapa identificou 162 lipídios diferencialmente expressos entre os dois grupos (utilizando o volcano plot com fold change = 1.5; valor de p = 0,05). Além disso, a análise hierárquica aglomerativa por cluster indicou uma clara separação entre os grupos em relação a abundância de determinadas classes lipídicas. O estudo mostrou que ESI-MS associada ao método de MRM-profiling é uma abordagem bastante adequada para investigar a lipidômica de células espermáticas pois permitiu a avaliação do perfil lipídico dos espermatozoides humanos de maneira rápida e sensível, utilizando quantidades mínimas de amostra. As diferenças observadas entre os dois grupos são consistentes com a literatura, no entanto, serão necessários mais estudos para detectar possíveis biomarcadores para a fertilidade masculina. A lista de 417 lipídios detectados neste estudo tem grande valor na caracterização lipídica do espermatozoide humano e poderá servir como base para estudos futuros.