Interação de radicais nitróxidos com a molécula de hemoglobina: um estudo por RPE

• Ano de defesa: 1984
• Autor(a) principal: Perussi, Janice Rodrigues
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: electron paramagnetic resonance; hemoglobin; hemoglobina; marcador de spin; nitroxide radicals; radicais nitróxidos; ressonância paramagnética eletrônica; spin label
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/54/54133/tde-07042026-101620/

A molécula de hemoglobina tem sido intensamente estudada pela bioquímica e biofísica molecular. Na literatura, observa-se que o método de marcação de spin tem tido grande aplicação no estudo desta proteína. Este método consiste da introdução de um radical livre estável no sistema biológico e análise dos espectros de Ressonância Paramagnética Eletrônica (RPE). Com isso, obtêm-se informações sobre alterações estruturais que ocorrem na proteína. Uma questão bastante discutida sobre a aplicação desse método é a especificidade da marcação de uma proteína por um radical nitróxido. De modo geral, o espectro de RPE de uma proteína marcada compõe-se de um sinal imobilizado e outro menos imobilizado. No presente trabalho fez-se um estudo da ligação de hemoglobina humana aos radicais nitróxidos derivados da maleimida e do isotiocianato com o objetivo de caracterizar os possíveis sítios de ligação destes radicais. Os resultados obtidos levam à conclusão de que os marcadores, em condições controladas de pH e sem excesso de reagente, ligam-se aos grupos -SH β-93 da hemoglobina produzindo um espectro imobilizado. Uma pequena fração do sinal \"livre\" é interpretado como sinal devido à proteína desnaturada. Íons de cobre (II) foram utilizados como sonda paramagnética a fim de se obter informações adicionais sobre esse problema. Assim, comprovou-se que o sítio do cobre está próximo ao sítio do marcador, o que causa uma interação magnética dipolar forte entre estes dois centros paramagnéticos, alterando os espectros de RPE. A adição de cobre à hemoglobina causa uma desnaturação que se reflete na aparição do sinal \"livre\" para a hemoglobina marcada.