Avaliação do padrão de metilação do gene SOX3 em pacientes com diferenças do desenvolvimento sexual 46,XX por anormalidades do desenvolvimento gonadal (SRY negativos)

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Silva, Elinaelma Suelane do Nascimento
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 46 XX Disorders of Sex Development; Diferenças do Desenvolvimento Sexual 46 XX; DNA Methylation; Epigenômica; Epigenomics; Metilação do DNA; SOX3
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5166/tde-07102025-113940/

Inúmeros genes interagem no processo de determinação gonadal, formando uma cascata gênica composta por duas vias antagônicas: a via masculina (SOX9/FGF9) e a feminina (RSPO1/WNT4/CTNNB1). A via predominante determinará o desenvolvimento gonadal. Raramente, o tecido gonadal em indivíduos 46,XX pode se diferenciar completamente em testículos (DDS 46,XX testicular -T) ou apresentar a coexistência de ambos tecidos no mesmo indivíduo (DDS 46,XX ovário-testicular - OT). O SOX3, um membro da família de proteínas SOX (SRY-related HMG box), regula positivamente a expressão do SOX9 na via masculina. Em humanos, rearranjos, duplicações ou deleções próximas às regiões conservadas do SOX3 foram relacionados ao desenvolvimento testicular em pacientes 46,XX. Salamon et al. analisaram o perfil de metilação da região promotora do Sox3 em gônadas de cães com DDS e observaram uma taxa média de metilação maior em cães com DDS 78,XX-OT em comparação aos ovários controle. Baseados nesses resultados, os autores sugeriram que a metilação de Sox3 pode ter um papel na etiologia dos cães DDS-OT. Neste estudo avaliamos o padrão de metilação da região promotora do SOX3 em amostras de tecido gonadal (ovários, testículos e ovotestis) de pacientes DDS 46,XX por anormalidades do desenvolvimento gonadal, SRY negativo e comparamos os padrões observados nas amostras de sangue e gônadas com os de indivíduos controles. O padrão de metilação de dois sítios CpGs (CpG-1 e 2) dessa região foi estudado nos tecidos gonadais de 5 pacientes DDS OT e dois DDS ovariano (O), e em 9 gônadas controles (5 ovários e 4 testículos). Amostras de DNA extraído de leucócitos de sangue periférico de 14 pacientes 46,XX (12 DDS-OT e dois DDS-O) e 8 controles (5 indivíduos 46,XX e 3 46,XY) também foram analisadas. Esse estudo foi feito a partir da conversão das amostras de DNA por bissulfito de sódio (EZ DNA Methylation-Lightning Kit), seguido da amplificação da região de interesse e do pirosequenciamento (PyroMark Q24 Autoprep) utilizando primers específicos. As análises mostraram que os controles 46,XY apresentaram uma média percentual de metilação significativamente menor (p < 0,001) em comparação às amostras dos 46,XX, no tecido gonadal e no sangue. Nos pacientes, não foram identificadas diferenças significativas nas médias percentuais de metilação entre os tipos de gônadas: testículo isolado, ovários isolados e ovotestis. Além disso, as amostras de sangue dos pacientes com OT, ovários e dos controles 46,XX apresentaram perfis de metilação semelhantes. A comparação entre os tecidos (sangue x gônadas), revelou que nos indivíduos controles os padrões de metilação eram distintos. Nos pacientes, essa diferença foi observada apenas no sítio CpG1. Em conclusão, os perfis de metilação dos sítios CpG-1 e CpG-2 não mostraram variações significativas, sugerindo que não estão associados à etiologia da anormalidade gonadal. Este estudo é pioneiro na análise do padrão de metilação dos sítios CpG-1 e CpG-2 no promotor do SOX3 em gônadas e sangue de pacientes com DDS 46,XX OT. A continuidade da investigação de outros sítios CpG na região promotora do SOX3 é necessária, e poderá fornecer novos conhecimentos sobre o papel da regulação epigenética no desenvolvimento gonadal.