O papel virucida das armadilhas extracelulares de neutrófilos na COVID-19

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Almeida, Cicero José Luiz dos Ramos
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: COVID-19; Imunidade inata; Innate immunity; NETs; Neutrófilos; Neutrophils
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-25112025-173749/

A COVID-19 é uma doença respiratória infecciosa causada pelo vírus SARS-CoV-2. A inflamação causada por essa infecção viral é caracterizada por lesão pulmonar intensa, infiltração de neutrófilos e liberação exacerbada de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), que contribuem para dano tecidual em indivíduos com infecção moderada a grave. No entanto, não se sabe se as NETs também podem estar envolvidas na inibição da replicação do SARS-CoV-2, possuindo um papel dual durante a infecção. Portanto, nosso objetivo foi investigar o papel virucida dos neutrófilos através da produção de NETs na COVID-19. Para tanto, neutrófilos de indivíduos saudáveis que foram infectados in vitro com SARS-CoV-2, assim como de pacientes com COVID-19 foram utilizados para analisar a interação das redes extracelulares com as partículas virais. Os neutrófilos também foram pré-tratados ou não com inibidor de PAD4 e infectados in vitro com SARS-CoV-2 para analisar a formação de NETs e a carga viral. Para analisar o papel das NETs na inativação viral em outros tipos celulares, células epiteliais da linhagem Caco2 foram infectadas in vitro com SARS-CoV-2 na presença de NETs purificadas de neutrófilos humanos que receberam diferentes estímulos como PMA, LPS e o próprio SARS-CoV-2. Essas células foram caracterizadas quanto a replicação viral e a viabilidade celular. As NETs também foram tratadas com inibidores farmacológicos de moléculas microbicidas como NE, MPO e histonas para avaliar o envolvimento dessas moléculas na inativação viral. Por fim, camundongos K18 hACE2 foram infectados e tratados ou não com DNase I para avaliar o papel das NETs na inativação viral nas primeiras 48h pós-infecção. Os resultados mostraram que as partículas virais se colocalizam com NETs nos neutrófilos isolados de pacientes com COVID-19 ou de indivíduos saudáveis que foram infectados in vitro com SARS-CoV-2. A inibição da produção de NETs aumentou a replicação do vírus nos neutrófilos. Paralelamente, NETs isoladas restringiram a capacidade do vírus de infectar e replicar em células epiteliais. O efeito virucida das NETs não foi dependente da atividade de NE ou MPO, mas sim da integridade das redes de DNA e histonas H3 e H4. No modelo murino de infecção com SARS-CoV-2, observamos maior carga viral em animais tratados com DNase I. Diante do exposto, os resultados indicam que as NETs atuam no controle da replicação e infecção pelo SARS-CoV-2. Assim, nossos resultados fornecem evidências do papel da NETose como um mecanismo de captura e inibição viral do SARS-CoV-2, revelando novos mecanismos inatos no contexto da COVID-19.