Novas metodologias para identificação e quantificação de glicopeptídeos e glicanos em fluídos biológicos: um caso de estudo de malária placentária.

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Santiago, Verônica Feijoli
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertacoes da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Ciências Biomédicas
• Palavras-chave em Português: Glicoproteômica; Malária placentária; Proteômica; Vesículas extracelulares; Extracellular vesicles; Glycoproteomics; Placental malaria; Proteomics
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42131/tde-13042026-164853/

A malária é uma doença infecciosa causada por parasitas <i>Plasmodium </i>spp e transmitida pela picada de mosquitos fêmeas do gênero <i>Anopheles</i>. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, em 2021, cerca de 13 milhões de mulheres grávidas na África Subsaariana foram expostas aos riscos do paludismo na gravidez (MiP), especialmente em mães primigestas e mães de segunda viagem. As mulheres grávidas são um dos grupos susceptíveis ao desenvolvimento de malária grave, estando sujeitas a complicações clínicas. Além disso, as consequências da malária na gravidez que afetam o feto são a prematuridade, aborto, baixo peso ao nascer e restrição do crescimento intra-uterino. Durante a infecção por malária, os eritrócitos infectados podem atingir a placenta, resultando em malária placentária. Ademais, a activação descontrolada do sistema complemento resulta em complicações na gravidez para o feto. Atualmente, não existem marcadores periféricos específicos para o diagnóstico em mulheres grávidas infectadas com <i>Plasmodium falciparum</i>. Neste estudo, analisamos detalhadamente o proteoma plasmático materno, o glicoproteoma, e o conteúdo proteico das vesícula extracelulares para a identificação de potenciais biomarcadores de MiP e a associação desta assinatura proteica com os desfechos em recém-nascidos. Na primeira parte da análise, descrevemos uma assinatura periférica do proteoma plasmático em camundongons BALB/c fêmeas prenhes infectadas com <i>Plasmodium beghei </i>ANKA e mulheres grávidas infectadas por <i>Plasmodium falciparum </i>no parto, utilizando espectrometria de massas como técnica de alta resolução e precisão. As proteínas reguladas em ambos os organismos estão envolvidas na activação do sistema complemento durante a malária na gravidez. Foi observado a desregulação dos componentes do sistema complemento e dos seus inibidores em camundongos prenhes e mulheres grávidas infectadas. Os dados apresentados neste estudo destacam a exarcerbada ativação do sistema complemento na malária gestacional. Na segunda parte da análise, dentre as alterações periféricas no proteoma com o plasma do cordão umbilical foram observadas proteínas com reduzida abundância identificadas no plasma periférico do grupo infectado, na qual destaca-se a atractina, uma glicoproteína com actividade protease tipo serina em neuropeptídios com papel na activação e mielinização das células T. O ensaio ELISA confirmou que as alterações nos níveis de atractina foram identificadas em amostras infectadas do plasma periférico e plasma do umbilical do cordão umbilical de uma forma específica para espécie de <i>Plasmodium</i>. Os nossos dados mostraram uma correlação positiva entre a circunferência da cabeça e os níveis de atractina. Na terceira parte deste estudo, foi realizada uma análise glicoproteômica tanto em amostras murinas como humanas de MiP. Foi identificado um perfil de glicosilação diferente entre os grupos infectado e controle, com a maioria dos glicopeptídeos com abundância reduzida durante a infecção na gravidez. Além disso, as composições dos glicanos foram alteradas, tendo a sialilação e a fucosilação aumentado durante a malária na gravidez. Na terceira parte deste estudo, foi descrita a caracterização das vesículas extracelulares e do conteúdo proteico vesicular durante a malária na gravidez. O proteoma das EVs difere do proteoma de plasma total durante a MiP. Os resultados apresentam uma análise aprofundada do proteoma e do glicoproteoma EV do plasma, mostrando vários potenciais candidatos a biomarcadores para MiP.