O complexo [Fe(GS)(H2O)5] como modelo para o ferro lábil celular
| Ano de defesa: | 2025 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
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| Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-13052025-100232/ |
Resumo: | O Ferro Lábil (LIP) representa uma reserva celular ubíqua, dinâmica e rigidamente regulada de Fe(II), homeostaticamente controlada para ser utilizada na metalação seletiva de novas apo-proteínas de ferro. Apesar da sua significância no metabolismo do ferro, a identidade e as propriedades de ligação do LIP ainda permanecem incertas. Assumindo que o LIP se associa a um constituinte celular C na forma de um complexo (CLIP) e utilizando o quelante de LIP Calceína (CA), desenvolvemos anteriormente um modelo de ligação que foi testado experimentalmente em diversos modelos celulares. Os resultados obtidos para a concentração total de C (CT) e para a constante de afinidade termodinâmica (Kd) de CLIP, calculados a partir do modelo, confrontam a hipótese existente de que o LIP está associado à glutationa (GSH/GS) na forma do complexo [FeGS(H2O)5]. O presente estudo investigou essa hipótese de maneira mais detalhada em macrófagos (RAW 264.7), um modelo celular relevante para o metabolismo do ferro, que apresenta altos níveis de LIP. Os resultados mostraram que a diminuição da concentração de GSH em mais de dez vezes não alterou as concentrações de CT ou Kd, nem afetou a reatividade do LIP com monóxido de nitrogênio (NO•). Portanto, o complexo [FeGS(H2O)5] não representa uma fração significativa de CLIP. |
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O complexo [Fe(GS)(H2O)5] como modelo para o ferro lábil celularThe complex [Fe(GS)(H2O)5] as a model for labile iron poolBSOBSOCalceinCalceínaCellsCélulasFerroFluorescenceFluorescênciaGlutathioneGlutationaIronLIPLIPRAW 264.7RAW 264.7O Ferro Lábil (LIP) representa uma reserva celular ubíqua, dinâmica e rigidamente regulada de Fe(II), homeostaticamente controlada para ser utilizada na metalação seletiva de novas apo-proteínas de ferro. Apesar da sua significância no metabolismo do ferro, a identidade e as propriedades de ligação do LIP ainda permanecem incertas. Assumindo que o LIP se associa a um constituinte celular C na forma de um complexo (CLIP) e utilizando o quelante de LIP Calceína (CA), desenvolvemos anteriormente um modelo de ligação que foi testado experimentalmente em diversos modelos celulares. Os resultados obtidos para a concentração total de C (CT) e para a constante de afinidade termodinâmica (Kd) de CLIP, calculados a partir do modelo, confrontam a hipótese existente de que o LIP está associado à glutationa (GSH/GS) na forma do complexo [FeGS(H2O)5]. O presente estudo investigou essa hipótese de maneira mais detalhada em macrófagos (RAW 264.7), um modelo celular relevante para o metabolismo do ferro, que apresenta altos níveis de LIP. Os resultados mostraram que a diminuição da concentração de GSH em mais de dez vezes não alterou as concentrações de CT ou Kd, nem afetou a reatividade do LIP com monóxido de nitrogênio (NO•). Portanto, o complexo [FeGS(H2O)5] não representa uma fração significativa de CLIP.The Labile Iron Pool (LIP) represents a ubiquitous, dynamic, and tightly regulated cellular reservoir of Fe(II), homeostatically controlled to be used in the selective metalation of new apo-iron proteins. Despite its significance in iron metabolism, the identity and binding properties of LIP remain uncertain. Assuming that LIP is associated with a cellular constituent C in the form of a complex (CLIP) and using the LIP chelator Calcein (CA), we previously developed a binding model that was experimentally tested in various cell models. The results obtained for the total concentration of C (CT) and the thermodynamic affinity constant (Kd) of CLIP, calculated from the model, challenge the existing hypothesis that LIP is associated with glutathione (GSH/GS) in the form of the [FeGS(H2O)5] complex. This study investigated this hypothesis in more detail in macrophages (RAW 264.7), a cell model relevant to iron metabolism, which exhibits high levels of LIP. The results showed that a more than tenfold reduction in GSH concentration did not alter CT or Kd, nor did it affect the reactivity of LIP with NO•. Therefore, the [FeGS(H2O)5] complex does not represent a significant fraction of CLIP.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPToledo Junior, José CarlosHernandes, Maria Beatriz Braghetto2025-03-12info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-13052025-100232/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-06-09T09:12:02Zoai:teses.usp.br:tde-13052025-100232Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-06-09T09:12:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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